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细胞结团最常见的原因是在细胞裂解之后,培养基中存在游离DNA和细胞碎片,DNA的粘性使细胞和其他碎片聚集成大的团块。
以下是细胞裂解和DNA被释放到培养基中的一些原因:
消化过度:过度使用蛋白水解酶(如常用于细胞分离的胰蛋白酶)可能会导致细胞结团;
环境应力:机械力、反复冻融循环和其他环境应力可加速细胞死亡;
组织分解:通过化学、机械或酶法从初生组织制备单细胞悬浮液可能会导致一些细胞破裂。从组织制备单细胞悬浮液时,通常需要胶原酶消化细胞外基质;
过度生长:当细胞达到融合状态时,细胞碎片和细胞裂解产生的游离DNA就会堆积过多。
预防措施
按说明书使用MaxACA抗接团剂:MaxACA 适合于在 CHO、HEK293、昆虫以及疫苗细胞在批次及流加培养工艺中作为细胞抗结团剂使用。
二价阳离子:柠檬酸盐和EDTA等螯合剂可以用于去除细胞培养基中的钙离子。
细胞密度:传代前,参考细胞系文献或者已知的特性来获取推荐的细胞密度。
操作:在进行细胞分离时,应小心处理细胞并使用适当的离心机设置。微小的结团可以通过搅碎,或者轻柔地上下吹打细胞来解决。
支原体污染:处理掉被污染的细胞,消毒培养室和细胞培养箱。遵循良好的实验室规范以避免污染。